主要成分与含量
试 剂 | 数 量 |
抗原包被板 | 1块 |
标记羊抗犬IgG | 0.5ml |
质控阳性血清 | 1瓶 |
质控阴性血清 | 1瓶 |
样品稀释液 | 30ml |
酶标抗体稀释液 | 20ml |
洗涤液（W）（20×） | 20ml |
底物A、B液 | 各7ml |
终止液（S） | 7ml |
作用与用途
用于酶联免疫吸附试验，检测犬血清中的抗狂犬病毒IgG抗体。
用法与判定
1 需要自备的材料
1.1 去离子水或生理盐水
1.2 可调移液器
1.3 1000ml的量筒
1.4 酶标仪
1.5 37℃温箱
2 预备步骤
2.1 血清灭活 将待检样品预先在56℃水浴中30分钟进行热灭活处理 。
2.2 温度平衡 实验前将试剂盒从2～8℃冰箱取出，置室温平衡30分钟以上。
2.3 版面布置 做好质控阳性、质控阴性血清和待检样品的版面布置记录 。
2.4 质控阳性血清、质控阴性血清的稀释
用0.5ml样品稀释液复溶质控阳性血清和质控阴性血清 ，并作10倍系列稀释至1:100。
2.5 待检血清稀释 将待检血清10倍系列稀释至1:100。
3 检测步骤
3.1 加样 将1:100稀释的质控阳性血清 、质控阴性血清和待检样品按照版面布置加入板孔内，100μl/孔 ，均作2孔重复 。
3.2 孵育 将酶标板置于37℃恒温培养箱内 ，孵育30分钟 。
3.3 洗板 用纯化水将浓缩洗涤液进行20倍稀释备用，弃掉板孔内液体 ，加洗涤液200μl/孔，洗涤5次，甩干。
3.4 加酶标抗体 用酶标抗体稀释液按照1 ：100稀释酶标抗体 ，100μl/孔 。
3.5 孵育 将酶标板置于37℃恒温培养箱内 ，孵育60分钟。
3.6 洗板 弃掉孔内液体，加洗涤液200μl/孔，洗涤5次，甩干。
3.7 显色 底物A、B液等体积混合，每孔加100ul。
3.8 孵育 将酶标板置于37℃恒温培养箱内，避光孵育20min 。
3.9 终止 每孔加终止液50μl ，5分钟内测定结果。
3.10 检测 用酶标仪测定并记录各孔在450nm波长处的吸光度（OD450nm）值。
4 结果判定
4.1 测有效性 当质控阳性血清OD450nm值≥0.6，质控阴性血清OD450nm值≤0.1 ，试验有效。
4.2 检测结果判定 待检样品OD450nm值≥质控阳性血清OD450nm值，认为待检样品血清抗体达到保护水平（0.5IU/ml） ，待检样品OD450nm值＜质控阳性OD450nm值，则认为待检样品血清抗体未达到保护水平（0.5IU/ml）。
注意事项
(1) 本试剂盒仅用于检测犬血清中狂犬病毒IgG抗体。
(2) 不要使用过了有效期的试剂，不同批次试剂盒的成分不要混用。
(3) 所有试剂2～8℃储存，使用前所有的试剂需平衡至室温。
(4) 所有的试剂避免接触皮肤和眼睛 ，如果碰到 ，立即用冷水冲洗接触处。
(5) 在样品采集，储存和运输过程中避免污染 。
(6) 避免溶液被金属离子 、氧化剂和清洁剂污染，每个容器一定要清洁，对酶标记物和底物不要使用同一个容器和吸头。
(7) 检测样品预先进行热灭活（56℃ 、30min），建议样品在-20℃条件下保存。操作过程中的移液 、时间和洗涤都必须精确控制。
(8) 试剂盒开封后未用完的试剂盒，质控阴性和阳性血清应-20℃以下冻存，其余试剂应2～8℃保存，ELISA板条密封条件下2～8℃保存 ，可于1个月内用完。
规格
96孔/盒
贮藏与有效期
2~8℃保存 ，有效期为12个月 。
批准文号
兽药生字031418122
